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捷諾特色譜柱一些使用心得分享

更新時(shí)間:2018-11-15   點(diǎn)擊次數(shù):2358次
  液相色譜儀是進(jìn)行定量分析,雜質(zhì)檢查等分析工作中主要的精密儀器,色譜柱是液相色譜儀的zui核心部件。在這里,介紹一下捷諾特色譜柱使用中的注意事項(xiàng)及使用心得。
  一、柱頭類型和不銹鋼毛細(xì)管接頭的匹配
  捷諾特色譜柱是消耗品,不是儀器原配的情況很多,如果接頭和柱頭深度匹配將會(huì)產(chǎn)生漏液或者死體積過(guò)大的現(xiàn)象。接頭比柱頭深度長(zhǎng),不易擰緊而漏液;接頭比柱頭深度短,柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積,使譜帶展寬和峰拖尾。
  二、溶劑的匹配轉(zhuǎn)換
  捷諾特色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑,如果和流動(dòng)相不匹配,使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)換。特別是流動(dòng)村j含緩沖鹽時(shí),如保存溶劑足純有機(jī)相或有機(jī)相比例高,直接將新柱接人使用,會(huì)導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出,造成柱頭堵塞。建議儀器和色譜柱經(jīng)常使用,用10%的有機(jī)溶劑保持即可。
  三、流動(dòng)相及待測(cè)樣品的過(guò)濾
  日常分析工作中,我們使用的流動(dòng)栩和待測(cè)樣品應(yīng)用0.45pm濾膜過(guò)濾后再連接或注入到色譜儀上。對(duì)于有機(jī)相比例高的流動(dòng)栩可以一起過(guò)濾出來(lái)備用,但是有機(jī)相比例小的流動(dòng)相一定要現(xiàn)用現(xiàn)濾,分析結(jié)束時(shí)一定要先用10%的有機(jī)溶劑沖洗管路及色譜柱,為有機(jī)相少的流動(dòng)相容易滋生細(xì)菌,造成色譜柱堵寒,影響色譜柱性能。
  四、捷諾特色譜柱分析時(shí)應(yīng)進(jìn)行平衡和老化
  進(jìn)行的方法是運(yùn)行幾次完整的分析程序(包括進(jìn)樣),直到觀察到峰形、保留時(shí)間和峰面積穩(wěn)定為止。對(duì)某些特定的待測(cè)物,如分子量大于1000的,閃擴(kuò)散速度慢,老化時(shí)間相應(yīng)要長(zhǎng),可采取大濃度進(jìn)樣或在同一個(gè)洗脫周期內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣多針的方式加快老化。
  五、pH使用范圍
  一般認(rèn)為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范足2-8,如果選用的是高品質(zhì)硅膠,加上高密度鍵合和雙封尾,使pH耐受范同zui大提高到lO。注射用頭孢拉定流動(dòng)村1pH值為8,對(duì)色譜柱傷害很大,需要選擇pH值耐受性高的色譜柱。
  六、峰形異常
  峰形對(duì)稱性的優(yōu)劣對(duì)峰面積和分離度有很大的影響,從而影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。先檢查樣品足否過(guò)載,由于樣品過(guò)載引起的峰形后拖不能通過(guò)改變色譜條件消除。如果發(fā)現(xiàn)過(guò)載,需降低進(jìn)樣量(包括進(jìn)樣體積或濃度),進(jìn)樣量越小,峰形越好,例子如頭孢尼西鈉的測(cè)定。其次,硅醇基次級(jí)保留引起部分峰拖尾。這種情況發(fā)生,選擇高密鍵合和*的雙蜂尾工藝的色譜柱能改善峰形。另外,溶解樣品的溶劑洗脫能力比流動(dòng)相強(qiáng)會(huì)發(fā)生峰前延,所以樣品選用流動(dòng)相溶解。
  七、捷諾特色譜柱保存
  短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動(dòng)相(不含緩沖鹽)保存為佳,以盡量減少下次使用的平衡時(shí)間。一般只建議在長(zhǎng)期保存反相柱的時(shí)候用純醇或乙腈,使用80%左右有機(jī)相保存也屬好的選擇,且足以避免長(zhǎng)菌。強(qiáng)烈建議在柱身上貼標(biāo)簽標(biāo)明保存溶劑。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱,可加0.05%化鈉溶液防止K菌。正相柱無(wú)論是短期還足長(zhǎng)期,都推薦保存住所用流動(dòng)相巾。
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